乳铁蛋白是乳品中兼具营养供给与生理调节价值的关键功能活性蛋白,精准测定其含量是乳品质量管控与品质评价的重要环节?对目前乳品乳铁蛋白检测的主流技术手段超高效液相色谱-紫外检测(ultra-high performance liquid chromatography with ultraviolet detection,UPLC-UV)与液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)2 种方法的检测性能?操作流程及适用范围开展系统比较?UPLC-UV法采用 C?色谱柱分离,以280 nm作为特征检测波长,通过磷酸盐缓冲液提取结合肝素亲和柱净化完成前处理,以标准曲线外标法定量?该方法仪器普及度高,加标回收率可达82.32%~98.07%,定量限为1 mg/100 g 相关系数>0.999,重现性良好,适配乳品企业常规批量样品检测需求,但方法抗基质干扰能力一般,对复杂基质中痕量乳铁蛋白的检测灵敏度不足,不能测定变性的乳铁蛋白?LC-MS/MS法则通过样品溶解?酶解筛选特异性特征肽段,采用多反应监测模式?标准曲线内标法定量,具备极强的抗基质干扰能力,定量限可低至0.2 mg/100 g,可实现乳铁蛋白总量的测定,适配婴幼儿配方乳粉?超高温灭菌纯牛乳等复杂基质低含量乳铁蛋白样品检测,但该方法仪器成本高,标准物质配套不足,操作流程繁琐,检测效率相对偏低?

通过研究免疫亲和柱性能、免疫亲和柱净化时上样液温度、洗脱液种类等因素对乳粉中免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）含量检测的影响，建立一种乳粉中IgG检测的高效液相色谱法。乳粉样品用磷酸缓冲液进行提取，提取液经免疫亲和柱富集纯化，洗脱液采用C4反相色谱柱（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）分离，高效液相色谱-紫外检测器检测，外标法定量。结果表明，方法适用于不同IgG含量的乳粉，在10～500 μg/mL线性范围内标准曲线相关性良好，方法检出限为80 mg/kg，定量限为300 mg/kg，在300、600、3 000 mg/kg 3 个加标水平下，加标回收率和相对标准偏差均满足GB 5009.295—2023《食品安全国家标准 化学分析方法验证通则》要求。该方法简单高效、结果准确性高，能为新功能乳制品营养价值评价及产品宣称提供精准的技术支持。

基于反相超高效液相色谱建立乳粉中1-脱氧野尻霉素含量测定方法。样品经盐酸溶液（0.01 mol/L）-甲醇（1∶1，V/V）超声提取、低温离心净化后，在碱性条件下与衍生化试剂芴甲氧羰酰氯反应，随后用甘氨酸中和衍生物，并以1%（V/V）乙酸溶液终止反应。经反相C18柱分离后，采用二极管阵列检测器于266 nm波长处检测，通过保留时间定性，外标法定量。结果表明，1-脱氧野尻霉素在1～50 μg/mL范围内线性良好，定量限为18.0 mg/kg，检出限为6.0 mg/kg；在18.0～270.0 mg/kg加标水平下，1-脱氧野尻霉素加标回收率分别为105.4%～106.6%、94.1%～97.4%、96.7%～102.7%、100.5%～104.5%，相对标准偏差分别为1.18%、1.76%、2.08%、1.57%。本方法操作灵敏度高、准确度高、重复性好，适用于乳粉中1-脱氧野尻霉素含量测定。

基于固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法建立牛乳中乙烯利残留检测方法。样品预处理阶段，以甲酸溶液作为提取溶剂，采用氨基固相萃取柱净化样品，以0.1%甲酸-50 mmol/L甲酸铵溶液和乙腈为流动相，采用Waters Anionic Polar Pesticide色谱柱（150 mm×2.1 mm，5 μm），以梯度洗脱方式对目标物进行分离。以电喷雾电离负离子模式扫描，在多反应监测模式下，采用基质匹配外标法定量。结果表明，乙烯利在2～100 ng/mL质量浓度范围内展现出良好的线性关系（R2＞0.99），检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg。在1.0、2.0、10.0 μg/kg加标水平下，加标回收率为92.50%～113.76%，精密度为3.04%～4.60%。综上所述，该方法具有准确度高、特异性强、重复性好等优点，适用于牛乳中乙烯利残留测定。

建立超高效液相色谱方法测定乳及乳制品中柠檬酸的含量。样品经亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀，超声提取，低温冷冻离心沉淀蛋白和脂肪，取上清液，Poroshell 120 Aq-C18（4.6 mm×100.0 mm，2.7 μm）分离，以磷酸二氢铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，运用紫外检测器进行检测，外标法定量。结果表明：标准曲线线性良好，相关系数在0.999 9以上，平均加标回收率为95.3%～104.8%，检出限为100 mg/kg，相对标准偏差为0.16%～2.41%。该方法简便、快速、分离效果好，适用于乳及乳制品中柠檬酸的定量分析。

建立了超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra performance high Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry, UPLC-MS/MS）结合固相萃取柱测定牛奶中乙烯利的检测方法。在样品预处理阶段，选用甲酸水溶液作为高效的提取溶剂，并通过氨基固相萃取柱实现了样品的净化，并利用Waters Anionic Polar Pesticide色谱柱(150 mm×2.1 mm，5 μm)对目标物进行了精确的分离。流动相体系由0.1 %甲酸与50 mmol/L甲酸铵水溶液组成的水相和乙腈组成的有机相构成，通过梯度洗脱实现了有效的分离。在检测过程中采用了电喷雾离子源负离子方式扫描，并在多反应监测（multiple reaction monitoring, MRM）模式下对乙烯利进行了准确的检测，运用了基质匹配外标法进行定量，确保了结果的可靠性。实验结果表明，乙烯利在2~100 ng/mL的浓度范围内展现出了良好的线性关系（r2>0.99），该方法的方法检出限达到了0.5 μg/kg，定量限则为1.0 μg/kg。在1.0 μg/kg、2.0 μg/kg、10.0 μg/kg浓度水平下，方法的回收率稳定在92.5 %至113.8 %之间，精密度保持在3.0 %至4.6 %的范围内。综上所述，该方法具有准确度高、特异性强、准确度和重复性好等优点，非常适用于牛奶中乙烯利的分析测定。