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1. 乳及乳制品中食源性致病菌快速检测技术的应用研究进展

赵淑环，王云霞，刘丽君，李翠枝，吕志勇

乳业科学与技术 2023, 46 (1): 62-67. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220905-054

摘要（35）

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PDF （1273KB）（19）

由于乳制品营养丰富，为金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、克罗诺杆菌等食源性致病菌提供了良好的生长环境，严重威胁乳制品相关的食品安全，因此对乳制品中食源性致病菌进行快速、准确检测是防治和检测食源性致病菌工作中必不可少的环节。近年来，分子生物学、免疫学等检测分析技术快速发展，相较于传统致病菌检测方法的繁琐耗时，这些方法灵敏度高、检测速度快、操作简单，因而备受关注。本文对近年来食源性致病菌检测新技术及应用进行综述，并对乳制品中食源性致病菌快速检测技术可能的发展趋势进行展望，以期为乳制品中食源性致病菌快速检测提供参考。

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2. 生牛乳中芽孢杆菌的分离鉴定及其耐热性

侯霞霞, 王云霞, 刘丽君, 李翠枝, 吕志勇

乳业科学与技术 2022, 45 (6): 1-6. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220913-057

摘要（552）

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PDF （2441KB）（747）

生牛乳杀菌后残留少数芽孢具有极强耐受性，在一定条件下芽孢大量繁殖，使牛乳发生变质，严重影响产品品质和消费者健康。采集并选择含有芽孢杆菌的生牛乳样品，进行需氧芽孢杆菌和嗜热需氧芽孢杆菌的分离，通过形态学、生理生化和分子生物学方法对分离菌株进行鉴定，同时对分离到的嗜热需氧芽孢杆菌进行耐热性研究。结果表明：共分离出10?株芽孢杆菌，其中3?株为嗜热需氧芽孢杆菌，7?株为需氧芽孢杆菌，其中能耐受115?℃/15?min热处理的有凝结芽孢杆菌和克劳氏芽孢杆菌，121?℃/20?min热处理可以将生牛乳中芽孢杆菌全部杀灭，致死率达100%，芽孢数下降4?个数量级；生牛乳中芽孢杆菌的优势菌有枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、明胶芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和克劳氏芽孢杆菌；耐热性较强的有凝结芽孢杆菌和克劳氏芽孢杆菌，最高能耐受115?℃/15?min热处理。

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3. 牛乳菌落总数测定的不确定度评定

井丽娟, 王云霞, 李翠枝, 吕志勇, 刘丽君

乳业科学与技术 2021, 44 (2): 21-25. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.02.005

摘要（229）

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PDF （2596KB）（293）

对牛乳样品菌落总数的测定结果进行不确定度评定，为检测过程的质量控制提供科学依据。依据GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》检测牛乳样品的菌落总数，按照JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》分析该检测结果不确定度的来源并建立数学模型，然后分别对引入的不确定度分量进行评定，最终合成菌落总数测定的不确定度。结果表明：牛乳样品菌落总数测定结果的扩展不确定度为0.043 4，结果对数值取值区间为[3.924，4.010]，该样品的菌落总数为8 395～10

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4. 乳粉中发酵乳杆菌CECT5716微生物检测方法的建立

王云霞, 侯霞霞, 赵淑环, 井丽娟, 刘丽君, 李翠枝

乳业科学与技术 2020, 43 (3): 23-26. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2020.03.005

摘要（190）

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PDF （2293KB）（159）

近年来乳粉中添加益生菌逐渐成为研究热点之一，为保证产品质量和安全，建立乳粉中发酵乳杆菌CECT5716的微生物检测方法。结果表明：在以缓冲蛋白胨水为稀释液进行10 倍系列稀释后，采用MRS平板涂布法，（36±1） ℃厌氧培养（48±2） h后，乳粉中发酵乳杆菌可准确计数，且能与乳粉中添加的双歧杆菌属细菌明显区分；该方法较GB 4789.35—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》方法更适合发酵乳杆菌计数，具有区分度高、培养时间短、操作简单、重复性好、准确性高的优点；该方法增加了菌株16S rDNA序列测定，以进一步对发酵乳杆菌进行分子鉴定；通过对20 份自制样品进行检测评价，表明所建立的方法与国标方法的准确性无显著性差异（P=0.127）。

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5. 生物芯片技术检测奶牛饲料中多种真菌毒素

王云霞, 赵淑环, 侯霞霞, 刘丽君, 李翠枝, 吕志勇

乳业科学与技术 2019, 42 (4): 30-33. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2019.04.007

摘要（116）

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PDF （1677KB）（67）

利用生物芯片真菌毒素阵列，选用其中的赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮4 个组分，同时测定其在奶牛饲料中的残留量，考察该生物芯片的准确性、精密度和重现性等指标。结果表明：4 种真菌毒素的标准曲线线性相关系数均可达到0.99以上；试剂盒质控样品和阴性样品2 个水平的加标回收率在80%～120%之间，变异系数（coefficient of variance，CV）在15%以内，方法准确性和重复性较好；对奶牛饲料样品检测结果重现性考察的CV在10%以内，表明方法重现性较好；与高效液相色谱法相比，2 种检测方法的结果差异性小，且生物芯片法前处理更为简便。真菌毒素阵列生物芯片法操作简单、结果准确，缩短了大量样本的筛查时间，为批量样品筛查提供了可靠的技术保证。

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6. 肠道细菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应指纹图谱技术用于细菌分型的研究进展

侯霞霞, 王云霞, 胡雪, 吕志勇, 刘丽君, 李翠枝

乳业科学与技术 2019, 42 (2): 28-34. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2019.02.006

摘要（125）

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PDF （1667KB）（164）

肠道细菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction，ERIC-PCR）指纹图谱技术利用普遍存在于生物体内的ERIC进行引物设计，通过基因扩增，获得能够表征其基因组结构的产物，该方法简单易行、重复性好、用时短，被广泛应用于细菌基因分型及同源性判别。本文简述细菌分型的研究背景和ERIC-PCR指纹图谱技术的原理及特点，归纳该技术在细菌基因分型方面的优缺点及其在常见食源性致病菌基因分型中的应用现状，并对ERIC-PCR指纹图谱技术应用于乳品企业污染菌溯源的研究进行展望。

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7. 离子色谱法检测乳制品中硫氰酸根离子

王云霞, 杜晓华, 孙丽华, 李翠枝, 刘丽君, 邵建波

乳业科学与技术 2014, 37 (6): 22-25. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2014.06.006

摘要（152）

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PDF （1222KB）（272）

通过采用乙腈沉淀乳粉和牛乳中的蛋白质后,移取上清液经过微孔滤膜过滤、LC-C18 SPE柱提纯去除干扰的有机物质后,滤液经离子色谱检测仪检测分析,从而得到样品中硫氰酸根离子含量.淋洗液经过优化后选用1.7 mmol/L碳酸氢钠+ 1.8 mmol/L碳酸钠+10％丙酮水溶液进行洗脱,抑制剂使用0.2％硫酸进行抑制器活化再生.该方法的硫氰酸根离子定量检出限为2.0 mg/kg,标准曲线线性相关系数R2可达到0.99以上,检测范围为0.1～20 mg/kg (mg/L),回收率在93％～97％之间,重复性实验得出相对标准偏差在0.8％～1.34％.对标准乳粉进行准确度检测,准确度可达到98％.该方法操作简便、结果准确,重复性良好,检测限低,适用于乳制品中硫氰酸根离子的检测.

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8. 荧光定量聚合酶链反应检测乳品中肉毒梭菌

孙丽华, 王云霞, 杜晓华, 李翠枝, 刘丽君, 邵建波

乳业科学与技术 2013, 36 (6): 24-26. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2013.06.007

摘要（114）

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PDF （1598KB）（92）

通过实时荧光定量聚合酶链反应方法检测乳粉与乳清粉中的A、B、E、F四型肉毒梭菌,对肉毒梭菌荧光定量聚合酶链反应试剂盒中的阳性对照品及10、102、103、104倍梯度稀释的阳性对照品做出AB混合型和EF混合型的标准曲线,循环域值具有极好的特异性、重复性和准确性.对通过国标方法与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准方法检测长出疑似菌落的82份乳粉与乳清粉采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测,均检测不到样品中含A、B、E、F四型肉毒梭菌.

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9. HPLC法检测乳品中对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素

万鹏, 赵贞, 李翠枝, 邵建波, 王云霞, 刘春霞

乳业科学与技术 2013, 36 (3): 9-11. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2013.03.003

摘要（154）

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PDF （1259KB）（59）

建立了乳制品中的对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素的高效液相色谱分析方法.样品用甲醇提取后,使用C18反相色谱柱分离,以甲醇-醋酸水溶液为流动相,紫外检测器检测,检测波长256nm和305nm条件下5种防腐剂在35min之内完全分离.在一定条件下各组分的相关系数均大于0.9990,线形范围1～100mg/kg,回收率为83.7％～103％.

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