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1. 微滴式数字PCR技术定量检测发酵乳中醋化醋杆菌

张雅伦, 王赞, 张瑞, 陈勃旭, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2023, 46 (2): 13-17. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220908-055

摘要（125）

HTML （4）

PDF （2201KB）（58）

建立一种微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）定量检测发酵乳中醋化醋杆菌的技术。根据醋化醋杆菌ITS基因序列设计特异性引物和探针，通过反应温度筛选优化ddPCR扩增条件，通过多种菌株扩增验证方法特异性，通过人工添加醋化醋杆菌验证方法检出限，通过ddPCR法实测结果和计数法测定结果之间的比较对其绝对定量进行系统性研究。结果表明：建立的发酵乳中醋化醋杆菌ddPCR定量检测方法，反应条件中最适退火温度为54.6?℃，方法特异性强，检出限为7.2×101?CFU/mL，灵敏度高，定量偏差率为23.73%。该方法可以满足发酵乳中醋化醋杆菌定量检测需求。

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2. 发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

王赞, 李献, 王慧, 许苗苗, 张捷, 刘帅, 周巍, 史国华

乳业科学与技术 2021, 44 (4): 6-10. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002

摘要（207）

HTML （1）

PDF （1668KB）（207）

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。

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3. 酸乳中葡糖醋杆菌赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立

唐心怡, 刘波, 张涛, 李永艳, 张翠侠, 王赞, 章晶晶, 周巍

乳业科学与技术 2017, 40 (2): 30-33. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2017.02.007

摘要（144）

PDF （1811KB）（73）

建立酸乳中葡糖醋杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)检测方法。根据葡糖醋杆菌16S基因序列(基因号为HQ677466.1)设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的浓度。通过HDA法直接检测酸乳中的葡糖醋杆菌,并确定其检出限,在建立的HDA体系中对酸乳中多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法的特异性。结果表明:用HDA法检测酸乳中葡糖醋杆菌,得到了与设计序列长度(101 bp)一致的基因片段,检出限为102 CFU/g,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.1 μg和5.0 μg。该方法用于检测酸乳中葡糖醋杆菌的灵敏度高、耗时短。

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4. 环介导等温扩增技术检测酸乳中蜡样芽孢杆菌

周巍, 张薇, 刘亮, 刘东, 王赞, 秦丽, 赵勇, 张岩

乳业科学与技术 2013, 36 (5): 29-31. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2013.05.007

摘要（23）

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PDF （1451KB）（6）

目的:建立快速准确检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的方法.方法:根据蜡样芽孢杆菌hblA基因设计特异性引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)直接检测酸乳中蜡样芽孢杆菌,扩增产物电泳检测.结果:LAMP法检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的特异性强,方法检出限6.4CFU/mL,人工污染检出限21CFU/mL.结论:LAMP法用于检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的灵敏度高、耗时短,为酸乳中蜡样芽孢杆菌的快速检测提供了新的方法.

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