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1. 基于飞行时间质谱法的单核细胞增生李斯特氏菌定性质控样品研制

张雅伦, 杨帆, 张涛, 张瑞, 李献, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2022, 45 (6): 27-32. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220920-061

摘要（148）

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通过真空冷冻干燥技术成功制备出单核细胞增生李斯特氏菌定性质控样品，并系统分析质控样品的均匀性和稳定性。通过优化冻干基质条件，得到制备质控样品的最佳条件。通过培养计数和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术，验证定性质控样品的均匀性和稳定性。结果表明：制备的单增李斯特菌定性质控样品为白色、质地均匀小球，均匀性验证实验质控样品培养计数结果F=0.567，小于临界值，表明均匀性一致；运输稳定性实验验证了质控样品在37、25?℃环境下含量几乎没有下降，计数稳定；贮藏稳定性实验验证了质控样品在－20?℃贮藏28?d后的复苏率为101.5%，在4?℃条件下贮藏28?d后的复苏率为99.6%，说明该样品均匀性和稳定性良好，可以作为阳性质控样品用于单增李斯特菌检测和质量控制。

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2. 发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

王赞, 李献, 王慧, 许苗苗, 张捷, 刘帅, 周巍, 史国华

乳业科学与技术 2021, 44 (4): 6-10. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002

摘要（207）

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PDF （1668KB）（207）

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。