检索结果

Select

1. TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测低温酸乳中常见的霉菌和酵母

张捷，陈勃旭，杜海宽，张子仑，严陶陶，陈佳，周巍

乳业科学与技术 2024, 47 (5): 20-24. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20240703-049

摘要（70）

HTML （3）

PDF （2127KB）（80）

为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率，根据保守基因延伸因子1α（elongation factor 1α，EF-1α）序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针，利用实时荧光定量聚合酶链式反应，基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中常见真菌与乳酸菌基因组DNA为扩增模板进行特异性检验，并对方法灵敏度与重复性进行检验，同时构建标准曲线。结果表明：根据EF-1α基因设计的引物与探针特异性良好；所构建的标准曲线相关系数均大于0.99；该方法检测酵母菌的灵敏度为101?CFU/mL，检测霉菌的灵敏度为102?CFU/mL；重复性检验中组内与组间的变异系数均小于2%，表明方法具有良好的可靠性与稳定性，适用于低温酸乳中霉菌与酵母菌的快速检测。

相关文章 | 多维度评价

Select

2. 发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

王赞, 李献, 王慧, 许苗苗, 张捷, 刘帅, 周巍, 史国华

乳业科学与技术 2021, 44 (4): 6-10. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002

摘要（207）

HTML （1）

PDF （1668KB）（207）

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。

相关文章 | 多维度评价

Select

3. 快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

刘东, 张捷, 朱华东, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2020, 43 (3): 12-16. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2020.03.003

摘要（133）

HTML （1）

PDF （1894KB）（141）

建立赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列（基因号为KF896260.1）为目的基因，设计特异性引物，并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量，建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测，验证方法特异性，通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌，并确定其检出限。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌，反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg，扩增产物与设计序列长度（309 bp）一致，特异性良好，检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。