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1. TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测低温酸乳中常见的霉菌和酵母

张捷，陈勃旭，杜海宽，张子仑，严陶陶，陈佳，周巍

乳业科学与技术 2024, 47 (5): 20-24. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20240703-049

摘要（70）

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PDF （2127KB）（80）

为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率，根据保守基因延伸因子1α（elongation factor 1α，EF-1α）序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针，利用实时荧光定量聚合酶链式反应，基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中常见真菌与乳酸菌基因组DNA为扩增模板进行特异性检验，并对方法灵敏度与重复性进行检验，同时构建标准曲线。结果表明：根据EF-1α基因设计的引物与探针特异性良好；所构建的标准曲线相关系数均大于0.99；该方法检测酵母菌的灵敏度为101?CFU/mL，检测霉菌的灵敏度为102?CFU/mL；重复性检验中组内与组间的变异系数均小于2%，表明方法具有良好的可靠性与稳定性，适用于低温酸乳中霉菌与酵母菌的快速检测。

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2. 微滴式数字PCR技术定量检测发酵乳中醋化醋杆菌

张雅伦, 王赞, 张瑞, 陈勃旭, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2023, 46 (2): 13-17. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220908-055

摘要（125）

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PDF （2201KB）（58）

建立一种微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）定量检测发酵乳中醋化醋杆菌的技术。根据醋化醋杆菌ITS基因序列设计特异性引物和探针，通过反应温度筛选优化ddPCR扩增条件，通过多种菌株扩增验证方法特异性，通过人工添加醋化醋杆菌验证方法检出限，通过ddPCR法实测结果和计数法测定结果之间的比较对其绝对定量进行系统性研究。结果表明：建立的发酵乳中醋化醋杆菌ddPCR定量检测方法，反应条件中最适退火温度为54.6?℃，方法特异性强，检出限为7.2×101?CFU/mL，灵敏度高，定量偏差率为23.73%。该方法可以满足发酵乳中醋化醋杆菌定量检测需求。

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3. 基于飞行时间质谱法的单核细胞增生李斯特氏菌定性质控样品研制

张雅伦, 杨帆, 张涛, 张瑞, 李献, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2022, 45 (6): 27-32. DOI: 10.7506/rykxyjs1671-5187-20220920-061

摘要（148）

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PDF （2073KB）（283）

通过真空冷冻干燥技术成功制备出单核细胞增生李斯特氏菌定性质控样品，并系统分析质控样品的均匀性和稳定性。通过优化冻干基质条件，得到制备质控样品的最佳条件。通过培养计数和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术，验证定性质控样品的均匀性和稳定性。结果表明：制备的单增李斯特菌定性质控样品为白色、质地均匀小球，均匀性验证实验质控样品培养计数结果F=0.567，小于临界值，表明均匀性一致；运输稳定性实验验证了质控样品在37、25?℃环境下含量几乎没有下降，计数稳定；贮藏稳定性实验验证了质控样品在－20?℃贮藏28?d后的复苏率为101.5%，在4?℃条件下贮藏28?d后的复苏率为99.6%，说明该样品均匀性和稳定性良好，可以作为阳性质控样品用于单增李斯特菌检测和质量控制。

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4. 含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌检测即用型质控样品研制

张涛, 张瑞, 张雅伦, 许苗苗, 王慧, 陈晨, 周巍, 史国华

乳业科学与技术 2021, 44 (4): 29-33. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.007

摘要（156）

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PDF （1990KB）（149）

为评估即用型沙门氏菌质控样品在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术鉴定含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌中的应用价值，通过验证即用型沙门氏菌质控样品的均匀性、稳定性，对－20 ℃贮藏0、14、28 d沙门氏菌质控样品进行质谱鉴定，最后用VITEK全自动微生物分析系统进行生化鉴定。结果表明：即用型沙门氏菌质控样品稳定性良好、均匀性符合要求，所得质谱图相近，VITEK生化鉴定结果为沙门氏菌；即用型沙门氏菌质控菌株可以作为含乳特殊医学用途配方食品中沙门氏菌检测质控样品使用。

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5. 发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

王赞, 李献, 王慧, 许苗苗, 张捷, 刘帅, 周巍, 史国华

乳业科学与技术 2021, 44 (4): 6-10. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002

摘要（207）

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PDF （1668KB）（207）

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。

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6. 快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

刘东, 张捷, 朱华东, 周巍, 张岩

乳业科学与技术 2020, 43 (3): 12-16. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2020.03.003

摘要（133）

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PDF （1894KB）（141）

建立赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列（基因号为KF896260.1）为目的基因，设计特异性引物，并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量，建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测，验证方法特异性，通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌，并确定其检出限。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌，反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg，扩增产物与设计序列长度（309 bp）一致，特异性良好，检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。

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7. 酸乳中葡糖醋杆菌赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立

唐心怡, 刘波, 张涛, 李永艳, 张翠侠, 王赞, 章晶晶, 周巍

乳业科学与技术 2017, 40 (2): 30-33. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2017.02.007

摘要（144）

PDF （1811KB）（73）

建立酸乳中葡糖醋杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)检测方法。根据葡糖醋杆菌16S基因序列(基因号为HQ677466.1)设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的浓度。通过HDA法直接检测酸乳中的葡糖醋杆菌,并确定其检出限,在建立的HDA体系中对酸乳中多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法的特异性。结果表明:用HDA法检测酸乳中葡糖醋杆菌,得到了与设计序列长度(101 bp)一致的基因片段,检出限为102 CFU/g,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.1 μg和5.0 μg。该方法用于检测酸乳中葡糖醋杆菌的灵敏度高、耗时短。

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8. 环介导等温扩增技术检测酸乳中蜡样芽孢杆菌

周巍, 张薇, 刘亮, 刘东, 王赞, 秦丽, 赵勇, 张岩

乳业科学与技术 2013, 36 (5): 29-31. DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2013.05.007

摘要（23）

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PDF （1451KB）（6）

目的:建立快速准确检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的方法.方法:根据蜡样芽孢杆菌hblA基因设计特异性引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)直接检测酸乳中蜡样芽孢杆菌,扩增产物电泳检测.结果:LAMP法检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的特异性强,方法检出限6.4CFU/mL,人工污染检出限21CFU/mL.结论:LAMP法用于检测酸乳中蜡样芽孢杆菌的灵敏度高、耗时短,为酸乳中蜡样芽孢杆菌的快速检测提供了新的方法.

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