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发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立
王赞, 李献, 王慧, 许苗苗, 张捷, 刘帅, 周巍, 史国华
乳业科学与技术
2021, 44 (4):
6-10.
DOI: 10.15922/j.cnki.jdst.2021.04.002
建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。
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